miRNA甲基化检测

样品类型 细胞、组织或RNA，其他样本类型请电询。 样品量 组织：100 mg – 1 g 细胞：2× 107 个以上 RNA：30-300 μg （OD260/280：1.6-2.3；RNA无明显降解28S:18S>1.5或RIN>7） 样品保存与运输 样品保存：细胞样品或新鲜组织块（切成 5-10 mg 的小块），可用 TRIzol 或 RNA 保护剂处理，液氮冻存后，-80℃ 保存， RNA 样品可溶于乙醇或 RNA-free 的超纯水中，-80℃ 保存，样品保存期间避免反复冻融。 样品运输：样品置于 1.5 mL 离心管中，封口膜封好，埋在盛有干冰的泡沫盒中运输。m6A 修饰就是真核生物 mRNA 中较常见存在的一种修饰形式，得到了常见的关注和研究。miRNA甲基化检测

m6A甲基化已经被证明与植物对病原体的抗性有关。然而，小麦(Triticum aestivum) 全转录组m6A谱及其在小麦抗小麦黄花叶病毒(WYMV)中的潜在生物学功能尚未见报道。这项研究是shou次鉴定两个不同抗WYMV小麦品种的转录组m6A修饰谱。通过对m6A-MeRIP-seq数据的分析，作者在WYMV感ran的抗病小麦品种(WRV)和WYMV感ran的敏感小麦品种(WSV)中鉴定出25752个共有m6A峰和30582个共有m6A基因，这些峰主要富集在编码序列3‘UTR区和终止密码子中。GO分析和RNA测序数据显示，m6A和mRNA水平均发生明显变化的基因与植物防御反应有关。山东m5C RNA甲基化云序生物一家长期做高通量测序的公司，口碑良好。

Nature | miR-1的位置特异性氧化导致心脏肥大 发表时间：2020年8月5日 影响因子：42.778 Nature上发表的来自韩国高丽大学Sung Wook团队的一篇研究在氧化还原相关疾病心肌肥大的大鼠模型中对氧化的miRNA进行了特异性测序研究。 作者在氧化还原相关疾病心肌肥大的大鼠模型中对氧化的microRNA（miRNA）进行了特异性测序。结果发现8-氧代鸟嘌呤2（o8G）修饰是选择性地在miRNA的特殊区域（位置2-8）产生的，并通过o8G-A碱基互补配对来调节其他mRNA。用肾上腺素能激动剂医治后主要在miR-1（7o8G-miR-1）的第7位诱导了o8G氧化修饰。单独引入的7o8G-miR-1或7U-miR-1（其中7位的G被U取代）足以引起小鼠心脏肥大，o8G-miR-1的mRNA靶基因在受影响的表型中起作用，反之对小鼠心肌细胞7o8G-miR-1的特异性抑制可减轻心脏肥大。o8G-miR-1也与心肌病患者有关。本研究表明miRNA的位置特异性氧化可以作为表观转录机制来协调病理生理学氧化还原介导的基因表达，为研究氧化修饰在病理生理学中的作用提供了新的思路。

研究表明，RNAm6A修饰影响mRNA的转录、定位、翻译、稳定性、剪接和核输出。然而，转录组m6A谱及其在白菜热胁迫中的潜在生物学作用尚缺乏足够的资料。通过MeRIP-seq获得白菜中RNA m6A修饰的first转录组全谱。同时，通过分析Input测序数据获得转录组数据。发现在正常组(CK)和热应激组(T43)中鉴定出11252个m6A共有峰和9729个含有m6A的共有基因。且CK组和T43组中，m6A峰均在3’UTR区高度富集。大约80%的基因有一个m6A位点。m6A峰的共识基序为AAACCV (V: U/A/G)。此外，关联分析发现m6A的甲基化程度与转录水平存在一定的相关性，说明m6A在基因表达中起一定的调控作用。植物中m6A修饰的研究主要集中在拟南芥的生长发育上。然而，拟南芥是一种盐敏感模式植物。因此，有必要对m6A修饰在高耐盐作物的盐胁迫响应中的作用进行研究。甜高粱是一种能源和饲料作物，非常适合在盐碱地生长。RNA甲基化普遍存在于拟南芥各个发育期。

案例1：哺乳动物mRNA内m7G甲基化转录组图谱 期刊：Molecular Cell 影响因子：14.25 由于全部种类的反转录酶均无法将RNA m7G位点逆转录成对应发生碱基突变的cDNA，为了准确的探究RNA内m7G甲基化情况，何川团队利用m7G自带正电荷的特征，开发了新的m7G单碱基深度测序方法。该方法能够将RNA内含m7G位点转化为另一种可产生反转录碱基变异的新位点，并依据碱基变异率估计m7G位点的甲基化水平。此方法随后也被证实可检测18S rRNA中的1639位内含m7G位点以及可揭示人类细胞tRNA中的22个46位内含m7G位点。并观测到其在mRNA分布、富集的共有序列及其它统计特征与m7G-MeRIP-seq数据基本保持一致。该文章不仅揭示了m7G甲基化在人类细胞中的分布特征，同时还发现METTL1是一种甲基转移酶，它在mRNA中催化了m7G甲基化修饰，并表明m7G的内部甲基化可以影响mRNA的翻译。而随后Cell Research也发表文章，证实环状RNA也会被m6A甲基化修饰。浙江m5C RNA甲基化

m5C RNA是近年来发现的一类在tRNA及rRNA高丰度存在的甲基化修饰。miRNA甲基化检测

植物m6A表观转录组修饰的生物学功能尚不完全清楚。CPSF30-L是聚腺苷酸化因子CPSF30的主要亚型，由CPSF30-S和一个m6A结合的YTH结构域组成。CPSF30-L的生物学作用及其在选择性聚腺苷酸化中结合m6A功能的分子机制尚不清楚。在这里，作者揭示了CPSF30-L是拟南芥m6A的“reader”，其m6A结合功能是花卉的转型和脱落酸(ABA)响应所必需的。此外，CPSF30-L的m6A结合活性增强了液体样核体的形成，其中CPSF30-L主要识别m6A修饰的远上游元件，调控聚腺苷酸化位点的选择。miRNA甲基化检测