西藏测序外泌体mRNA测序

外泌体于1983年被发现，是由于细胞膜内吞形成内体，内体限制膜发生多处凹陷，向内出芽形成微囊泡，从而形成的具有动态亚细胞结构的多囊泡体。大多数类型的细胞均可分泌外泌体。构成外泌体的主要成分为蛋白质、核酸和脂质。外泌体有多种分泌途径，对细胞间通信、疾病的传播及组织修复具有重要的调节作用。外泌体与受体细胞的结合方式多种多样，外泌体可以将膜蛋白或其内容物转移至受体细胞，也可以直接与受体细胞膜融合；此外，外泌体上的跨膜蛋白还可以直接作用于受体细胞膜表面的信号分子。外泌体普遍存在于生物体的免疫应答反应中，外泌体可以通过介导促炎症反应来促进免疫反应，tumour细胞分泌的外泌体还可以抑制免疫反应。通过商业化kit富集环状RNA，极大地提高了有效数据比例。西藏测序外泌体mRNA测序

外泌体（Exosomes）是一种直径在40-100nm的圆形单层膜结构，是细胞外泌囊泡中体积较小的一种。外泌体可被大多数细胞分泌，并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分，还包括一些RNA成分，如微小RNA(microRNA，miRNA)、长链非编码RNA（longnon-codingRNA，lncRNA）、mRNA和环状RNA（circularRNA，circRNA）。环状RNA（circularRNA）是近来新发现的一种非编码RNA分子，研究趋势火爆。环状RNA表达具有组织和疾病特异性，与组织发育、疾病发生和发展密切相关。此外环状RNA不易降解，可做为新型疾病分子标志物。外泌体环状RNA的研究势必会为疾病诊断与医治带来极大帮助。青海研究外泌体细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存。

多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。 所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。 外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。

大多数常规的膜出芽过程是使膜从细胞器变形到细胞质中，而外泌体是由于细胞膜内吞形成内体，内体限制膜发生多处凹陷，向内出芽形成微囊泡(intraluminal vesicles，ILVs)，从而转变为具有动态亚细胞结构的多囊泡体(multi-vesicle bodys，MVBs)，即晚期内体。MVBs可以在内体限制膜处通过至少2种机制产生：一种是内吞体分选转运复合体机制(endosomal sorting complex required for transport，ESCRT)，另一种是非依赖性的ESCRT机制。ESCRT机制由一组胞质蛋白复合物发挥作用，其能识别泛素化修饰的膜蛋白。环状RNA表达具有组织和疾病特异性，与组织发育、疾病发生和发展密切相关。

1983年，外泌体于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“Exosome”。随后的10年，外泌体并未受到足够的重视。直至1996年，G.Raposo发现类似于B淋巴细胞能分泌抗原提呈外泌体，这种外泌体携带MHC-Ⅱ类分子、共刺激因子和粘附因子。研究表明这种B细胞来源的外泌体可以直接刺激效应CD4+细胞的抗tumour反应。1998年，L.Zitvogel等发现树突细胞（DCcell）也能产生有抗原提呈能力的外泌体，而且外泌体含有功能性的MHC-Ⅰ类和Ⅱ类分子，还有共刺激因子。这种外泌体启动了特异性的CTL杀伤作用，促进了T细胞依赖的抗tumour效应。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯。重庆上海云序外泌体平台

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目前，外泌体的分离多采用超速离心、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤三种方法。超速离心：耗时耗力，往往需要8-30个小时；每次较多只能处理6个样品；需要大量的起始材料；产量不高。需一台超速离心机。将欲提取的细胞培养上清液10ml，在4℃的环境下，300×g10min，2000×g20min，弃沉淀，去除细胞；然后l0,000×g30min，弃沉淀，去除亚细胞成分；再用10,000×g60min，弃掉上清液，较后所得沉淀既为exosome，用30mlPBS溶液重新悬浮沉淀物，混匀后再以10,000×g60min，用lmlPBS溶液悬浮沉淀物提纯的exosome溶液分别装入eppendorf管内，置于-80℃冰箱内保存备用。西藏测序外泌体mRNA测序

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