湖北平台外泌体miRNA测序

外泌体的提取方式： 1、离心法：此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足。 2、过滤离心：这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样纯度不足。 3、密度梯度离心法：用此种方法分离到的外泌体纯度较高，但是前期准备工作繁杂 4、免疫磁珠法：这种方法可以保证外泌体形态的完整，特异性高、操作简单，但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。 5、色谱法：此种方法分离出的外泌体大小均一，但设备特殊，应用不普遍。外泌体可被大多数细胞分泌，并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分，还包括一些RNA成分。1983年，外泌体shou次于绵羊网织红细胞中被发现。湖北平台外泌体miRNA测序

一类外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，有文献报道称RAB4,RAB5和RAB11主要出现在早期以及回收的核内体中，RAB7和RAB9主要出现在晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白（包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9)）、热休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素（不成熟的树突状细胞）。中国澳门平台外泌体细胞样品或新鲜组织块可用TRIZOL或RNA保护剂处理，液氮冻存后-80℃保存。

外泌体的分离方法包括差速离心法、ExoQuick外泌体快速提取试剂盒法、免疫亲和沉降法、蔗糖密度梯度-超速离心法和微流体分离法等。其中差速离心法是较常用的外泌体分离方法，即通过较低的离心速度从培养基中分离出颗粒较大的物质，然后外泌体、小胞外囊泡及蛋白质再以非常高的速度(100000×g)离心产生沉淀。因此，差速离心只能富集而不能纯化外泌体。富集的外泌体、小胞外囊泡及蛋白质通过生物化学、质谱或电子显微镜等相关技术进行物理、化学及生物表征，从而得到进一步鉴别。

纳米颗粒跟zong分析技术（Nanosight Tracking Analysis，NTA）是一种比较新颖的表征纳米颗粒的方法，它可直接并实时观测纳米颗粒。NTA 通过光学显微镜收集纳米颗粒的散射光信号，拍摄一段纳米颗粒在溶液中做布朗运动的影像，对每个颗粒的布朗运动进行追zong和分析，从而计算出纳米颗粒的流体力学半径和浓度。 通过SDS-PAGE电泳分析得到Exosome中蛋白的含量及种类；通过Western-Blot检测Exosome中特定的蛋白表达情况。外泌体可被大多数细胞分泌，并分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。外泌体中不仅包含蛋白质成分，还包括一些RNA成分。外泌体（Exosomes）是一种直径在40-100 nm的圆形单层膜结构，是细胞外泌囊泡中体积较小的一种。

1983年，外泌体于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“Exosome”。随后的10年，外泌体并未受到足够的重视。直至1996年，G.Raposo发现类似于B淋巴细胞能分泌抗原提呈外泌体，这种外泌体携带MHC-Ⅱ类分子、共刺激因子和粘附因子。研究表明这种B细胞来源的外泌体可以直接刺激效应CD4+细胞的抗tumour反应。1998年，L.Zitvogel等发现树突细胞（DCcell）也能产生有抗原提呈能力的外泌体，而且外泌体含有功能性的MHC-Ⅰ类和Ⅱ类分子，还有共刺激因子。这种外泌体启动了特异性的CTL杀伤作用，促进了T细胞依赖的抗tumour效应。外泌体可促进生物体免疫应答反应。湖北外泌体分析

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