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样品类型 细胞、组织或RNA,其他样本类型请电询。 样品量 组织:100 mg – 1 g 细胞:2× 107 个以上 RNA:30-300 μg (OD260/280:1.6-2.3;RNA无明显降解28S:18S>1.5或RIN>7) 样品保存与运输 样品保存:细胞样品或新鲜组织块(切成 5-10 mg 的小块),可用 TRIzol 或 RNA 保护剂处理,液氮冻存后,-80℃ 保存, RNA 样品可溶于乙醇或 RNA-free 的超纯水中,-80℃ 保存,样品保存期间避免反复冻融。 样品运输:样品置于 1.5 mL 离心管中,封口膜封好,埋在盛有干冰的泡沫盒中运输。种种研究迹象表明m6A 存在于很多物种中,占到了 RNA甲基化修饰的80%。dna 转录 甲基化检测
研究表明,RNAm6A修饰影响mRNA的转录、定位、翻译、稳定性、剪接和核输出。然而,转录组m6A谱及其在白菜热胁迫中的潜在生物学作用尚缺乏足够的资料。通过MeRIP-seq获得白菜中RNAm6A修饰的first转录组全谱。同时,通过分析Input测序数据获得转录组数据。发现在正常组(CK)和热应激组(T43)中鉴定出11252个m6A共有峰和9729个含有m6A的共有基因。且CK组和T43组中,m6A峰均在3’UTR区高度富集。大约80%的基因有一个m6A位点。m6A峰的共识基序为AAACCV(V:U/A/G)。此外,关联分析发现m6A的甲基化程度与转录水平存在一定的相关性,说明m6A在基因表达中起一定的调控作用。陕西比色法检测整体甲基化云序生物一家长期做高通量测序的公司,口碑良好。
案例2:2’-O-RNA甲基化酶FTSJ3协助HIV病毒逃避宿主细胞免疫识别机制原文:FTSJ3isanRNA2’-O-methyltransferaserecruitedbyHIVtoavoidinnateimmunesensing期刊:Nature影响因子:41.6外国研究人员首先借助蛋白互作实验证实TRBP蛋白能够在不依赖于DICER酶的作用下与FTSJ3结合,形成复合物,因此推测,FTSJ3是一种2-O-甲基化转移酶。接着,体外和体内实验表明FTSJ3就是一种通过TRBP被招募到HIVRNA上的2-O-甲基化转移酶。通过优化的2’-O-RNA甲基化测序手段,证实在HIV病毒遗传信息的特定位置上存在依赖于FTSJ3的2-O-甲基化修饰。综上,该研究证实TRBP-FTSJ3复合物通过招募到HIV病毒RNA发生2-O-甲基化从而解释了HIV病毒逃避宿主细胞先天免疫识别的机制。
近年来,科学家们发现了一种可逆的RNA甲基化—m6A,即RNA分子腺嘌呤第6位氮原子上发生甲基化修饰(N6-methyladenosine,m6A)。研究发现,m6A是真核生物mRNA上常见的一种转录后修饰,m6A在细胞加速mRNA代谢和翻译,以及在细胞分化、胚胎发育和压力应答等过程中起重要作用。种种研究迹象表明m6A 存在于很多物种中,占到了 RNA甲基化修饰的80%。m6A除了分布在 mRNA 中,也出现在很多非编码 RNA中 ,如:环状RNA 、LncRNA等。Nature正刊发表文章,证实发生m6A RNA甲基化修饰可以调控mRNA稳定性。而随后Cell Research也发表文章,证实环状RNA也会被m6A甲基化修饰,并会促进环状RNA编码蛋白这一有趣的结论。ctDNA 的甲基化检测,同时结合了 ctDNA 测序于 DNA 甲基化测序的优势。
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ctDNA 的 5mC 甲基化修饰研究仍然是一个未被充分探索的领域。dna 转录 甲基化检测
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